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◆ 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)

一、服务内容

1、温和条件下进行蛋白抽提,BCA定量,调整蛋白浓度

2样品预处理:用Protein A/G Sepharose孵育

3、样品与IP抗体进行孵育

4洗涤Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex,并对免疫复合物进行变性处理

5沉淀产物SDSPAGE或者WB鉴定(目前暂无其它鉴定)

6Western blot检测

1) 电泳:聚丙烯酰胺凝胶SDS-PAGE分离蛋白样品

2) 湿法印(BLOTINGTank Transfer

3) 杂交:用抗体鉴定膜上的特定蛋白INCUBATION: Antibody

4) 化学发光检测(ECL胶片曝光,TotalLab Quant软件读取IOD值(可选)

7预实验及正式实验服务

二、样品要求(样品处理及保存见附件)

1细胞>1×107;组织>100mg;细菌湿重50mg;植物100mg;血清50ul

2样品蛋白浓度>1mg/ml,蛋白量200ug/样品

三、收费标准

服务项目

收费标准

实验周期

免疫共沉淀

8300/基因

3-4

免疫共沉淀+可曝光marker

8600/基因

3-4

ImageQuant TL读取条带IOD值及计算

 !

四、客户提供材料

1、新鲜或正确保存的样品

2、目的蛋白一抗

3、阳性对照样品(尽量提供)

4、相关文献(可选)

五、提交给客户结果

1、预实验曝光结果(胶片及扫描图),预实验采取2个一抗稀释度

2、正式实验曝光结果(胶片及扫描图)

3完整实验报告

4IOD值分析报告(可选)

六、服务说明

1待检测样品可以是待检测蛋白样品,也可以是细胞、组织等其他样品;

2免疫沉淀用抗体;

3检测用抗体

4、特异性二抗由北京赛诺博生物技术中心提供。

七、对照设置

1、空白:无抗体,只有protein A/G

2、阴性对照:无蛋白,有抗体及protein A/G

3、阴性对照:未转染细胞或者基因敲除样品

4、无关空白抗体

5、蛋白裂解液上清:Input

 

应用实例

 

 


 

 

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